PL1: PATOLOGIA PUBERDADE

PL 1: Bases laboratoriais dos exames sorológicos

Autor: João Maximiano

Faculdade de Ciências Médicas da UNIFENAS-BH

Sensibilidade X especificidade

A sensibilidade é a probabilidade de um teste dar positivo quando a pessoa está doente.

A especificidade é a probabilidade de um teste ser negativo quando não existe a doença.

O ideal é aplicar inicialmente um teste sensível promovendo uma triagem e posteriormente um teste específico de caráter confirmatório.

Exame sorológico

Conceito: ensaio laboratorial que envolva uma reação de imunoquímica de ligação de moléculas de anticorpo a um ou mais determinantes antigênicos, levando à formação de imunocomplexos (antígenos (Ag) – anticorpo (Ac))

Na prática de laboratório os testes sorológicos podem ser empregados na busca de antígenos e anticorpos. Observe o esquema abaixo:

Alguns conceitos sobre sorologia

Efeito prozona: na formação dos imunocomplexos, para que ocorra a reação é necessária quantidades equivalentes de antígeno e anticorpo. O excesso de um ou de outro pode ocultar a reação fornecendo um  dado falso-negativo. Considera-se efeito prozona a ausência de reação imunológica na presença de altas concentrações de anticorpos séricos

·         Janela imunológica: período de tempo compreendido entre a exposição ao agente infeccioso e o surgimento de algum marcador sorológico detectável. Fatores que influenciam a janela imunológica:

Ø  Natureza do agente infeccioso

Ø  Tamanho do inoculo

Ø  Eficácia da resposta imune do hospedeiro

Ø  Imunoensaio empregado,

·         Titulo: é expresso como o inverso da ultima diluição de soro que apresentou reação positiva

Com o sucesso da terapêutica um resultado que antes era positivo a titulo 1/64 passa a ser positivo a 1/4, por exemplo.

Principais métodos sorológicos

a)    Métodos de aglutinação: pode ser realizado em tubos ou placas e, um dos componentes da reação Ag-Ac deve estar fixado na superfície de partículas insolúveis. Após a formação do imunocomplexo, é possível visualizar a formação de agregados.  A reação de aglutinação pode variar de ausente até intensa passando por fraca. A intensidade da reação é influenciada por:

Ø  Classe a que pertence o anticorpo ( IgM aglutina 750 vezes mais que o IgG)

Ø  Concentração de eletrólitos

Ø  pH (ideal entre 6 – 8)

Ø  Tempo de incubação antígeno-anticorpo

Ø  Temperatura

Aglutinação direta: os determinantes antigênicos são constituídos naturalmente de estruturas insolúveis, como bactérias, hemácias e protozoários.

Aglutinação indireta: necessita de fixação de algum dos componentes da reação antígeno anticorpo na superfície de partículas insolúveis.

a)    Testes laboratoriais envolvidos na pesquisa da sífilis

Abordagem conceitual da doença

·         Conceito: doença infecciosa sistêmica de evolução crônica.

·         Agente etiológico: Treponema pallidum

·         Tipos de transmissão: adquirida (contato sexual) e congênita (durante a gestação).

·         Evolução da doença: 1) primária 2) secundária, 3) latente e 4) terciária.

Ø  Fase primária: caracterizada por aparecimento de uma lesão cutânea denominada cancro duro, que possui as bordas endurecidas e é rica em treponemas. Regride espontaneamente em 4 a 6 semanas e o aparecimento de anticorpos ocorre entre 1 e 4 semanas após o cancro.

Ø  Fase secundária: reaparecimento de lesões cutâneas disseminadas pelo corpo de caráter maculo-papulares não pruriginosas. Há o aparecimento de sinais sistêmicos como febre e linfadenopatia.

Ø  Fase latente: sucede a sífilis secundária e é caracterizada pela ausência de sinais ou sintomas clínicos. Portanto, só é detectável por exames laboratoriais.

Ø  Fase terciária: pode aparecer em qualquer período de tempo após a fase secundária mesmo depois de vários anos de latência. Caracterizada por necrose gomosa, lesões cardiovasculares e neurológicas também são características desta fase.

Exames laboratoriais na infecção pelo Treponema pallidum

Diagnóstico bacteriológico (pesquisa direta)

Estes testes podem ser utilizados somente nos casos de sífilis primária, secundária e congênita nos quais o treponema pode ser encontrado nas lesões.

Ø  Pesquisa de Treponema em microscópio de campo escuro: consiste na coleta e análise da amostra de exudato límpido que se forma no local da ferida.

Ø  Imunofluorescência direta: o treponema é identificado a partir da utilização de anticorpos marcados com fluoresceína.

Diagnóstico sorológico

·         Testes não treponêmicos (identificação de Ac inespecíficos)

Ø  VDRL: é um teste que possuí alta sensibilidade e baixa especificidade devendo, portanto ser confirmado com um teste treponêmico em caso de resultado positivo.

Técnica: uma gota do reagente á adicionada ao soro do paciente, a mistura é agitada por aproximadamente 5 minutos e o material é levado ao microscópio óptico para verificação da floculação. Soros reagentes devem ser titulados até que não mais se observe reação e o resultado deve ser liberado contendo a ultima diluição em que ocorreu floculação. (ex: reagente até 1/64)

Caso o clinico suspeite de sífilis secundária, o mesmo deve solicitar  VDRL qualitativo e quantitativo onde será feita a diluição em 1/10 do soro do paciente, uma vez que, as altas concentrações de anticorpos neste período podem propiciar o efeito prozona.

O VDRL é utilizado tanto no diagnóstico de triagem inicial como no controle do tratamento por meio de titulações.

·         Testes treponêmicos (identificação de Ac específicos)

Ø  Hemaglutinação indireta: neste caso utilizam-se hemácias recobertas por antígenos do Treponema pallidum. Se houver anticorpos contra Treponema ocorrerá reação de aglutinação das hemácias, formando um tapete no fundo da placa. Ausência de reação é caracterizada pela sedimentação das hemácias e formação de um pequeno circulo.

Ø  Imunufluorescência indireta (FTA-ABS): antígeno adsorvido no KIT é adicionado ao soro do paciente formando o complexo antígeno-anticorpo. Em uma segunda etapa um anticorpo anti-imunoglobulina humana contendo um marcador fluorescente é adicionado ao complexo previamente formado indicado um resultado positivo caso ocorra a fluorescência.

Recomendações para uso de exames laboratoriais na infecção pelo Treponema pallidum

Ø  Sífilis primária:

§  Pesquisa direta do microrganismo com confirmação em caso de resultado positivo.

§  VDRL após duas semanas do aparecimento do cancro mais confirmação após duas semanas da realização do teste caso tenha obtido um resultado negativo.

§  Se o VDRL for positivo deve ser confirmado com o FTA-ABS ou HAI.

Ø  Sífilis secundária

§  Pesquisa direta do microrganismo com confirmação em caso de resultado positivo.

§  VDRL muito sensível não sendo necessária repetição. O resultado positivo deve ser confirmado com teste treponêmico.

Ø  Sífilis terciária

§  Neste caso os testes não treponêmicos apresentam maior sensibilidade que os testes treponêmicos o que os torna pouco confiáveis nesta fase da doença. Os testes treponêmicos devem ser a ferramenta foco no diagnostico da sífilis terciária sendo necessário ao clínico relatar a suspeita ao laboratório.

Acompanhamento de tratamento

Via de regra, o acompanhamento do tratamento é realizado a partir do VDRL solicitado em três, seis e doze meses a partir do início do tratamento. A resposta adequada pode ser evidenciada por queda de quatro vezes nos títulos de VDRL após seis meses e de 8 vezes após 12 meses.

UNIFENAS RESUMIDA